收費辦事熱線：400-0531-699
馬尾松花粉及花粉類食物化學式主要的討論會
李 麗
摘 要：目標 研討馬尾松花粉的化學成份。方式 接納頻頻柱色譜法停止分手純化，按照光譜數據及理化性子判定化合物的布局。功能 分手判定了11個化合物，別離是β-谷甾醇(Ⅰ)、單硬脂酸甘油酯(Ⅱ)、1-正十六烷酸甘油酯(Ⅲ)、對羥基苯甲醛(Ⅳ)、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸(Ⅴ)、3，3′，5，5′，7-五羥基二氫黃酮醇(Ⅵ)、雙氫山奈素(Ⅶ)、對羥基苯甲酸(Ⅷ)、3，4-二羥基苯甲酸(Ⅸ)、山奈酚(Ⅹ)、丁二酸(Ⅺ)。論斷 化合物Ⅱ~Ⅺ均為首次從馬尾松花粉平分手獲得。
關頭詞：馬尾松花粉；化學成份；布局判定
Chemical constituents of Pinus massoniana pollen
LI Li
Abstract：Objective To study the chemical constituents of Pinus massoniana pollen. Methods The compounds were isolated and purified by repeated column chromatography and their structures were identified on the basis of physiochemical properties and spectral data. Results Eleven compounds were isolated and identified as β-sitosterol (Ⅰ)，2，3-Dihydroxypropyl octadecanoate (Ⅱ)，hexadecan-
oic acid 2，3-dihydroxy-propyl ester (Ⅲ)，p-Hydroxybenzaldehyde (Ⅳ)，3-hydroxy-
4-methoxy-benzoic acid (Ⅴ)，3，3′，5，5′，7-pentahydroflavanone (Ⅵ)，dihydrokaemp-
ferol (Ⅶ)，p-hydroxybenzcic acid (Ⅷ)，3，4-dihydroxybenzoic acid (Ⅸ)，kaempferol (Ⅹ) succinic acid (Ⅺ). Conclusion CompoundⅡ~Ⅺ are obtained from Pinus massoniana pollen for the first time.
Key words: Pinus massoniana pollen；chemical constituents；structure identification
松花粉別名松花、松黃，是我國松科動物馬尾松pinus massoniana Lamb.、油松pinus tabulaeformis Carr.或同屬數種動物的枯燥花粉[1]。始載于唐•《新修本草》，為鮮黃色或淡黃色細粉，其性味甘平無毒，是我國傳統食藥兼用的花粉種類。具備進步免疫力、抗朽邁、抗委靡、調劑機體代謝、降血脂和養顏等功能，在國際外已被普遍地利用于保健品、藥品、化裝品和飼料增加劑等范疇[2]。但到今朝為止，國際對松花粉化學成份的研討較少，外洋也鮮見報道，為了深切研討松花粉藥理活性的物資根本，本嘗試對馬尾松花粉的化學成份停止了體系的研討，分手并判定了11種化合物，別離為β-谷甾醇(Ⅰ)、單硬脂酸甘油酯(Ⅱ)、1-正十六烷酸甘油酯(Ⅲ)、對羥基苯甲醛(Ⅳ)、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸(Ⅴ)、3，3′，5，5′，7-五羥基二氫黃酮醇(Ⅵ)、雙氫山奈素(Ⅶ)、對羥基苯甲酸(Ⅷ)、3，4- 二羥基苯甲酸(Ⅸ)、山奈酚(Ⅹ)、丁二酸(Ⅺ)。此中，化合物Ⅱ~Ⅺ均為首次從馬尾松花粉平分手獲得。
1 儀器與資料
Stuart smp3 型熔點測定儀（未校訂）；Agilent Trap VL 型質譜儀；SHIMADZU UV-2201型紫外可見分光光度計；Bruker advanced 400 型核磁共振儀(內標TMS)；色譜用硅膠均為青島陸地化工場產物；所用試劑均為闡發純。松花粉由協作單元保健品公司供給。
2 提取與分手
破壁松花粉10 kg，甲醇滲漉，滲漉液收受接管甲醇，得浸膏。水混懸后順次用煤油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，獲得4個差別極性部位，煤油醚部位836 g，氯仿部位40 g，醋酸乙酯部位24 g，正丁醇部位54 g。此中，煤油醚部位經硅膠柱色譜，先用煤油醚洗脫，再用丙酮洗脫，丙酮洗脫液收受接管丙酮，獲得丙酮洗脫部位235 g。丙酮洗脫部位和氯仿部位用煤油醚-丙酮體系梯度洗脫，醋酸乙酯部位和正丁醇部位用氯仿-甲醇體系梯度洗脫，經頻頻硅膠柱層析，結晶及重結晶等方式，獲得化合物Ⅰ~Ⅲ(丙酮部位)，Ⅳ(氯仿部位)，Ⅴ~Ⅹ(醋酸乙酯部位)，Ⅺ(正丁醇部位)。
3 布局判定
無機化學物質Ⅰ：橘藍色針晶(120號汽油醚)，mp 135~137 ℃，10% H2SO4無水工業乙醇水氫氧化鈉溶液顯色為紫橘藍色；Liebermann-Burchard體現了陽型，預測該無機化學物質可以為甾體類；試品與規則品經薄層張開，在3個差的 張開機制中試品顯著從單一雀斑，處于碘的壓縮空氣中顯色及用10% 硫酸鈉無水工業乙醇水氫氧化鈉溶液顯色，試品與規則品的Rf值均意見分歧，且摻雜凝固點不飛行，故鑒定為β-谷甾醇(β-sitosterol)。
無機氧化物Ⅱ：橙紅色粉化(丁烷氣體醚-異丙醇)，ESI-MS (positive) m/z : 381.0 [M+Na]+，建議大家無機氧化物的份子量為358，1H-NMR (400 MHz，CDCl3) δ : 0.88 (3H，t，-CH3)，1.62 (2H，m)為2位-CH2-質子旌旗燈號，2.13 (1H，br. s，-OH)，2.56 (1H，br. s，-OH)，2.35 (2H，t，-CH2-C=O)，4.20 (2H，dd，-OCH2-)，3.93 (1H，m)為次甲產品子旌旗燈號，3.60 (1H，dd)和3.69 (1H，dd)是與羥基連接起來的上亞甲基上的質子旌旗燈號，聯系13C-NMR (400 MHz，CDCl3) δ : 174.3 (C-1)，34.2 (C-2)，22.7 (C-17)，14.1 (C-18)，70.3 (C-1′)，65.2 (C-2′)，63.4 (C-3′)，29.1~29.7 (C-3~16)；故辨別為單硬脂酸甘油酯(2，3-Dihydroxypropyl octadecanoate)。
化合物Ⅲ：紅色粉末(煤油醚-丙酮)，ESI-MS (positive) m/z : 330.9 [M+H]+，352.9 [M+Na]+，推知化合物的絕對份子量為330；1H-NMR (400 MHz，CDCl3) δ : 0.88 (3H，t，-CH3)，1.26(24H，s)，1.62 (2H，m，-CH2-)，2.35 (2H，t)，2.55 (1H，d，-OH)，2.35 (2H，t)，4.19 (2H，m)，3.60 (1H，dd)和3.70 (1H，dd) 是與羥基相連的上亞甲基上的質子旌旗燈號，3.93 (1H，m)，13C-NMR (400 MHz，CDCl3) δ : 174.3 (C-1)，70.3 (C-2′)，65.2 (C-3′)，63.4 (C-1′)，34.2 (C-2)，14.1 (C-1)；以上波譜數據與文獻[3]報道根基分歧，故判定為1-正十六烷酸甘油酯(hexadecanoic acid 2，3-dihydroxy-propyl ester)。
化合物Ⅳ：無色結晶(丙酮)，mp 113~118 ℃，1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 10.60 (1H，s，-OH)，9.79 (1H，s，-CHO)，7.76 (2H，d，J =8.56 Hz，H-2，6)，6.93 (2H，d，J =8.56 Hz，H-3，5)。13C-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 190.9 (C=O)，163.3 (C-4)，132.1 (C-2，6)，128.5 (C-1)，115.9 (C-3，5)。以上理化性子及波譜數據與文獻[4]報道根基分歧，故判定為對羥基苯甲醛(p-Hydroxybenzal- dehyde)。
化合物Ⅴ：紅色粉末(醋酸乙酯)，易溶于醋酸乙酯、甲醇、乙醇，mp 213~215 ℃；ESI-MS (positive) m/z : 169.2 [M+H]+，191.2 [M+Na]+；(negative) m/z : 167.1 [M-H]-，提醒化合物的份子量為168；1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 12.49 (1H，s，-COOH)，9.84 (1H，s，OH-3)，7.43~7.45 (2H，m，H-2，6)，6.84 (1H，d，J =8.68 Hz，H-5)為苯環上氫質子旌旗燈號，且存在鄰位代替氫，3.81 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 121.6 (C-1)，115.0 (C-2)，147.2 (C-3)，151.1 (C-4)，112.7 (C-5)，121.6 (C-6)，167.2 (C-7)，55.5 (-OCH3)；以上理化性子及波譜數據與文獻[5]報道根基分歧，故判定為3-羥基-4-甲氧基苯甲酸(3-hydroxy-4-methoxy-benzoic acid)。
化合物Ⅵ：淺黃色針晶(醋酸乙酯)，HCl-Mg，FeCl3和KBH4反映均呈陽性，Molish反映陽性，猜測為二氫黃酮或二氫黃酮醇類化合物。ESI-MS (positive) m/z : 304.7 [M+H]+，326.7 [M+Na]+；(negative) m/z : 302.6 [M-H]-，提醒化合物的份子量為304。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 11.90 (1H，s)，10.81 (1H，s)別離為A環6位和8位的氫質子旌旗燈號；4.98 (1H，d，J =11.1 Hz)和4.49 (1H，dd，J =11.1 Hz)別離是3位和2位氫質子的旌旗燈號，申明是二氫黃酮醇類化合物；δ : 10.80 (2H，b)為B環具備對稱布局的兩酚羥基質子旌旗燈號，δ : 6.74 (2H，s) 和6.87 (1H，s)別離是2′，6′位和4′位的氫質子旌旗燈號。13C-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 197.7 (C=O)，163.3 (C-5)，166.8 (C-7)，162.5 (C-9)，145.8 (C-4′)，128.0 (C-1′)，119.4 (C-6′)，144.9 (C-3′)，115.3 (C-5′)，115.1 (C-2′)，100.5 (C-10)，96.0 (C-6)，95.0 (C-8)，83.1 (C-2)，71.6 (C-3)。1H-NMR和13C-NMR譜數據均與文獻[6]分歧，故判定為3，3′，5，5′，7-五羥基二氫黃酮醇(3，3′，5，5′，7-pentahydroflavanone)。
化合物Ⅶ：淺黃色粉末(醋酸乙酯)，HCl-Mg，FeCl3和KBH4反映均呈陽性，Molish反映陽性，猜測為二氫黃酮或二氫黃酮醇類化合物。ESI-MS (positive) m/z : 288.6 [M+H]+，310.6 [M+Na]+；(negative) m/z : 258.6 [M-CO]-，提醒化合物的份子量為288。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 11.90 (1H，s，OH-5)，4.58 (1H，dd，J =11.4，6.0 Hz，H-3)，5.05 (1H，d，J =11.4 Hz，H-2)，5.91 (1H，d，J =2.0 Hz)和5.86 (1H，d，J =2.0 Hz)別離是6位和8位氫質子旌旗燈號，6.78 (2H，d，J =8.52 Hz，H-3′，5′)，7.31 (2H，d，J =8.52 Hz，H-2′，6′)；13C-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 197.8 (C=O)，166.8 (C-7)，163.3 (C-5)，162.6 (C-9)，157.7 (C-4′)，129.4 (C-2′，6′)，127.5 (C-1′)，114.9 (C-3′，5′)，100.4 (C-10)，96.0 (C-6)，95.0 (C-8)，82.9 (C-2)，71.5 (C-3)。1H-NMR和13C-NMR譜數據均與文獻[7]分歧，故判定為雙氫山奈素(dihydrokaem- pferol)。
化合物Ⅷ：土黃色粉末(醋酸乙酯)，易溶于醋酸乙酯、甲醇、乙醇、水，mp 210~213 ℃；與三氯化鐵反映陽性，故布局中能夠存在酚羥基；ESI-MS (negative) m/z : 136.6 [M-H]-，提醒化合物的絕對份子量為138；1H-NMR (400 MHz，DMSO- d6) δ : 12.40 (1H，br. s，-COOH)，10.21 (1H，br. s，-OH)，7.80 (2H，d，J =9.3 Hz，H-2，6)，6.82 (2H，d，J =9.3 Hz，H-3，5)；以上理化性子及波譜數據與文獻[8]報道根基分歧，故判定為對羥基苯甲酸(p-hydroxybenzcic acid)。
化合物Ⅸ：黃色針狀結晶(醋酸乙酯)，mp 205~208 ℃；三氯化鐵反映陽性，故布局中能夠存在酚羥基；ESI-MS (positive) m/z : 176.7 [M+Na]+；(negative) m/z : 152.6 [M-H]-，提醒化合物的絕對份子量為154；1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 12.35 (1H，br. s，-COOH)，9.58 (1H，br. s)和9.35 (1H，br. s)別離為3，4位的羥基氫旌旗燈號。7.34 (1H，d，J =2.0 Hz，H-2)，7.29 (1H，dd，J1 =8.2 Hz，J2 =2.0 Hz，H-6)，6.78 (1H，d，J =8.2 Hz，H-5)為苯環上的氫旌旗燈號，由巧合常數提醒，其代替地位為鄰間位的三代替。以上理化性子及波譜數據與文獻[9]報道根基分歧，故判定為3，4-二羥基苯甲酸(3，4-dihydroxybenzoic acid)。
化合物Ⅹ：黃色粉末(醋酸乙酯)，mp 274~276 ℃；與HCl-Mg反映陽性，可猜測為黃酮類化合物；ESI-MS (positive) m/z : 286.9 [M+H]+，308.9 [M+Na]+，提醒化合物的絕對份子量為286；1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 12.48 (1H，s，OH-5)，10.77 (1H，s，OH-7)，10.10 (1H，s，OH-4′)，9.38 (1H，s，OH-3)，6.20 (1H，d，J =1.8 Hz，H-6)，6.44 (1H，d，J =1.8 Hz，H-8)組成AB巧合體系，為化合物A環上的旌旗燈號，由巧合環境可推知A環為間位代替，是以進一步肯定化合物5、7位存在羥基；8.05 (2H，d，J =8.8 Hz，H-2′，6′)，6.93 (2H，d，J =8.8 Hz，H-3′，5′)組成AA´BB´巧合體系，為B環質子旌旗燈號，由巧合環境可知B環為對位代替，由此可進一步肯定化合物4´位存在羥基；13C-NMR (400 MHz，DMSO- d6) δ : 146.8 (C-2)，135.6 (C-3)，175.8 (C-4)，156.1 (C-5)，98.2 (C-6)，163.8 (C-7)，93.4 (C-8)，160.7 (C-9)，103.0 (C-10)，121.6 (C-1′)，129.4 (C-2′)，115.4 ( C-3′)，159.1 ( C-4′)，115.4 ( C-5′)，129.4 (C- 6′)；以上理化性子及波譜數據與文獻[10]報道根基分歧，故判定為山奈酚(kaempferol)。
化合物Ⅺ：無色片狀結晶(丙酮)，mp 182~184 ℃；遇溴甲酚綠顯黃色，提醒為羧酸類化合物；1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ : 12.13 (1H，s)為羧基質子旌旗燈號，2.42 (2H，s)為亞甲基氫質子旌旗燈號，份子中只要羧基一個結尾基團，提醒該化合物為一對稱布局，與文獻[11]報道根基分歧，故判定為丁二酸(succinic acid)。
參考文獻：
[1] 王敏. 松花粉的成份及藥理感化研討停頓 [J]. 安徽醫藥，2008，12(4) : 357-358.
[2] 李娜. 松花粉養分成份及藥理活性的研討停頓 [J]. 安徽農學傳遞，2008，14(13) :
125-127.
[3] The Sadtler Standard Spectra : Ir(Crating) 15257，1H-NMR 7198，13C-NMR 4802.
[4] Sadtler Research Laboratories. Sadtler stand NMR spectra [Z]. Philadelphia (USA) : Sadtler Research Laboratories，1970 : 7349 M.
[5] 尚小雅，李帥，等. 紅絨毛羊蹄甲的化學成份研討 [J]. 中國中藥雜志，2006，31(23) : 1954.
[6] 丁林生，梁僑麗，藤艷粉. 枳 子黃酮類成份研討 [J]. 藥學學報，1997，32(8) : 600-602.
[7] 于德泉，楊俊山，謝晶曦編. 闡發化學手冊. 第五分冊. 北京：化學產業出書社，1989 : 264.
[8] 馬大友，胡昌奇. 金雀根化學成份研討 [J]. 中國中藥雜志，2008，33(3) : 518.
[9] 黃明菊，曾光堯，等. 腫節風中黃酮苷類成份研討 [J]. 中國中藥雜志，2008，33(14) : 1701-1702.
[10] 鄒忠杰，鞠建華，等. 泥胡菜化學成份研討 [J]. 中國藥學雜志，2006，41(2) : 102-103.
[11] 周法興，梁培瑜. 廣西蛇藥中藤桔及鐵掃帚的酸性成份分手 [J]. 中草藥，1980，11(11) : 523.
